轻型β地中海贫血对糖化血红蛋白A1c检测

轻型β地中海贫血对糖化血红蛋白A1c检测

作者：索明环温冬梅张秀明吴剑杨陈亚琼徐全中李曼胡婷萧金丽张德才徐胜男

选自：中华检验医学杂志,,38(10):-.

糖化血红蛋白A1c(hemoglobinA1c，HbA1c)是葡萄糖进入红细胞后与血红蛋白A的β链N末端缬氨酸残基经过非酶促反应形成的产物，此反应过程缓慢而不可逆，反映的是过去2～3个月的平均血糖水平。这一指标是糖尿病血糖控制的金标准。早在年美国糖尿病协会(AmericanDiabetesAssociation,ADA)将HbA1c列为糖尿病诊断的指标之一[1]。然而，随着人们对HbA1c的重视和研究的深入，发现HbA1c的检测受很多因素的影响，包括地中海贫血、血红蛋白变异体、缺铁性贫血、溶血性贫血及肾脏病等[2]。这局限了HbA1c在临床上的广泛应用。为了使这一指标得到合理正确的应用，临床需要对各种影响因素进行深入的研究分析。本研究探讨轻型β地中海贫血患者对HbA1c的影响，旨在解决此类患者能否采用HbA1c判断血糖控制程度，为临床应用提供依据。

对象与方法

一、研究对象

收集年3月至8月来自医院的65例全血样本，分为正常对照组、非糖尿病组和糖尿病组，其中非糖尿病组和糖尿病组同时合并轻型β地中海贫血。40份正常对照样本为健康体检者EDTA–K2抗凝全血样本，排除任何血液病、慢性疾病等，年龄18～72岁，中位年龄36岁，其中男性18例，女性22例。20份轻型β地中海贫血患者样本作为非糖尿病组，年龄18～72岁，其中男性7例，女性13例。5份轻型β地中海贫血合并糖尿病的患者样本作为糖尿病组，糖尿病的诊断符合世界卫生组织(WHO)年诊断标准。所有EDTA–K2抗凝全血样本分装标记，放入–70℃冰箱保存。同时保留上述正常对照组和非糖尿病组的血清标本，检测糖化血清蛋白(Glycosylatedserumprotein，GSP)，以进一步排除糖尿病。采用法国Sebiacapillary2血红蛋白电泳仪和日本SysmexXE–血细胞分析仪筛查轻型β地中海贫血患者样本，其中0%≤HbF5%，3.5%HbA2≤7.0%，血常规结果平均红细胞体积(MCV)≤82fl，平均红细胞血红蛋白含量(MCH)≤27pg/fl，同时未合并血红蛋白变异体、妊娠、缺铁性贫血、肾脏疾病、溶血性贫血等疾病。所有参与本研究的受试者均签署知情同意书，经伦理委员会审核。

二、方法

1．仪器与试剂：

采用4种检测系统，分别为美国Bio–RadVariantⅡ、美国Bio–RadVariantⅡTurbo、美国PrimusUltra2及瑞士RocheModularPPI生化分析仪。(1)阳离子交换高效液相色谱法(ionexchangehighperformanceliquidchromatography，IE–HPLC)：采用美国Bio–RadVariantⅡ糖化血红蛋白检测仪，应用配套的试剂、分析柱、膜片及Bio–Rad配套质控品。按厂家要求个测试更换防护膜片，个测试更换分析柱，更换柱子后按要求进行活化校准。该检测系统通过了美国国家糖化血红蛋白标准化计划(TheNationalGlycohemoglobinStandardizationProgram，NGSP)Ⅰ级(LevelⅠLaboratory)实验室认证，结果可溯源至糖尿病控制和并发症实验(DiabetesControlandComplicationsTrial，DCCT)。该检测系统检测HbA1c的线性范围：3.1%～18.5%。(2)阳离子交换高效液相色谱法(IE–HPLC)：采用美国Bio–RadVariantⅡTurbo糖化血红蛋白检测仪，应用配套的试剂、防护柱、分析柱及Bio–Rad配套质控品。按厂家要求个测试更换防护柱，个测试更换分析柱，更换柱子后按要求进行活化校准。该检测系统检测HbA1c的线性范围：3.5%～19.0%。(3)硼酸盐亲和层析高效液相色谱法(affinitychromatographyhighperformanceliquidchromatography，AC–HPLC)：采用美国PrimusUltra2糖化血红蛋白分析仪。应用配套的试剂、分析柱。采用Bio–Rad公司的质控品。按要求反转更换柱子，定期做酶清洗。该检测系统检测HbA1c的线性范围：0.1%～33.0%。目前认为该系统抗干扰能力较好[3,4]。(4)免疫抑制比浊法(turbidimetricinhibitionimmunoassay，TINIA)：应用瑞士RocheModularPPI全自动生化分析仪，采用Roche配套的糖化血红蛋白测定试剂、质控品。该检测系统检测HbA1c的线性范围：14.7%。

2．检测条件：

通过简单的赋值传递与方法学比对提高检测系统结果的可比性[5,6]。选用2份接近Bio–Rad检测系统校准值的新鲜全血，其血常规各项指标正常，并且无血红蛋白变异体。应用通过NGSPⅠ级实验室认证的Bio–RadVariantⅡ检测系统对其赋值，每个标本检测3次，取平均值作为赋予值。用这2份新鲜全血校准Bio–RadVariantⅡTurbo、PrimusUltra2系统，RocheModularPPI全自动生化仪采用公式校准。校准后用4个检测系统分别检测10份不同浓度新鲜全血标本以进行方法学比对，标本浓度要求覆盖各个仪器的线性范围，每个标本检测2次，求平均值。按照NGSP实验室认证要求Bio–RadVariantⅡTurbo、PrimusUltra2、RocheModularPPI检测系统结果与Bio–RadVariantⅡ检测结果的相对偏差在–6%～＋6%之间(







































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