研究Protein，这些技术不得不看
2017-8-11 来源：不详 浏览次数：次RNA最近几年可火了，RNA小鲜肉F4：miRNA、lncRNA、circRNA、piRNA，它们直接或者间接调节mRNA的翻译、基因转录，这些科研热点也成为做实验发paper的最爱，不管核心还是SCI，不管是CNS还是低分SCI，不管是灌水还是酝酿大招，不带个非编码RNA（noncodingRNA）研究机制在里面都不好意思投稿，不拉上miRNA感觉故事讲不下去，可以编码蛋白、正经干活的mRNA被冷落，大家纷纷开始喜欢遍布细胞各处的监工：非编码RNA(ncRNA)
诚然ncRNA确实成为近些年颜值较高、能来事儿、人见人爱的十大杰青之一，但归根结底还要和表型联系在一起，最终还是要通过蛋白质去实现表观遗传的本领，所以发大文章、走上巅峰，除了抱ncRNA的大腿外，蛋白质的分析功夫可不能丢，这不，X湿兄这几天就在温故而知新：蛋白质的常规检测技术。
那么，我们对蛋白质的哪些特点感兴趣呢？
（一）蛋白质的分子量、有无亚基？
（二）蛋白质的序列
（三）蛋白质的功能预测
（四）胞内蛋白质在哪里工作？胞外蛋白呢？
（五）蛋白质的磷酸化检测
（六）蛋白质-蛋白质相互作用
（七）蛋白质和DNA、RNA相互作用
（一）蛋白质的分子量、有无亚基
技术：蛋白层析、SDS-PAGE、Native-PAGE
当你发现一个未曾被报道过的蛋白质，想要知道它的分子量大小、有无亚基时，你可以做以下实验，如血红蛋白就是四聚体。
1)天然蛋白的分离：蛋白层析法(这种情况较少)
也称分子筛层析，这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶（Sephadexged），下面这个品牌PharmaciaTM大家可以自行搜索一下，在蛋白层析界，那就是一拳超人般的存在，市场份额最大（小张说这是广告，要删了，但真不是广告啊）。
2)重组蛋白的分离：6*HIS标签、GST蛋白标签等
想当年X湿兄做了多少次重组蛋白的纯化啊，一把辛酸泪呢！
大家都钓过鱼吧，重组蛋白就是利用这种原理
1.池塘：大肠杆菌或哺乳动物细胞被诱导表达后混合物，目的蛋白(targetprotein)就在其中。
2.鱼饵：能特异性吸附蛋白质头部或尾部的蛋白标签（例如HIS组氨酸标签被镍离子吸附）
3.鱼竿：层析柱里面的凝胶填料，固相载体。
