郑大一附院余祖江等在Lancet发文,报

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第二代测序（Next-generationsequencing，NGS）又称为高通量测序（High-throughputsequencing），是基于PCR和基因芯片发展而来的DNA测序技术。年，罗氏推出了第一款二代测序仪-罗氏，生命科学开始进入高通量测序时代。后续随着Illumina系列测序平台的推出，极大降低了二代测序的价格，推动了高通量测序在生命科学各个研究领域的普及。目前，高通量测序已经成为一种常规研究方法，大量科研工作中均会用到。然而，二代测序技术在一些特定疾病诊断中的应用还有待进一步验证。

年3月27日，医院感染科的余祖江团队在顶级医学杂志Lancet上发表题为“Metagenomicnext-generationsequencingclinchesdiagnosisofleishmaniasis”的文章，报道了二代测序技术在利什曼病诊断中的应用情况。一名65岁的男子来郑大一附院就诊，该患者有15天的发烧、疲劳和厌食史。在来就诊前，医院接受了一定治疗，主要是使用了各种不同抗感染药物和退烧药，但均无效。患者之前身体健康，住在中国河南的农村地区，最近没有旅行史。对患者进行检查，除发现脾脏肿大（超声测量70mm厚，mm长）、体温39.6℃外，未发现其他异常。实验室检测显示，白细胞减少为2.15×/L(正常3.5-9.5)，红细胞减少为3.75×/L(正常4.3-5.8)，血红蛋白浓度降低为9.95g/dL，血小板减少为78×/L(正常-)，中性粒细胞绝对数为1.57×/L(正常1.8-6.3)，白蛋白浓度为31.6g/dL。HDL浓度为0.55mmol/L(正常0.91)。患者甘油三酯(1.83mmol/L；正常1.7)、D-二聚体(37.58mg/L；正常0~0.55)、降钙素原(0.ng/mL；正常0~0.)、铁蛋白(.5ng/mL；正常30~)、1,3-β-D-葡聚糖(.50pg/mL；正常0~)水平升高。患者球蛋白(27.0g/L；正常20~35)、纤维蛋白原(2.75g/L；正常2~4)、血清半乳甘露聚糖曲霉抗原试验(0.27μg/L；正常0~0.85)均在正常范围。T-SPOT.TB检测呈阴性。HIV和肿瘤标志物检测都是阴性的；血液和骨髓培养也都是阴性的。入院第二天，对患者做了骨髓抽吸，骨髓细胞学检查显示骨髓异常增生极低，并有一些噬血细胞。在这一阶段的诊断包括恶性淋巴瘤、噬血细胞综合征或一种不明原因的感染性疾病。医生决定静脉注射喷昔洛韦、比亚培南和口服伏立康唑治疗该患者，但病情没有改善。入院第5天，利用宏基因组二代测序技术（mNGS），对24小时内的外周血检测，发现了婴儿利什曼原虫和杜诺瓦尼利什曼原虫的个序列读数，占基因组覆盖率的0.%。然后做了rK39检测，结果呈阳性。第二次骨髓抽吸显示利什曼原虫无鞭毛体，证实了mNGS的结果。患者被诊断为内脏利什曼病，开始静脉注射两性霉素B，每天50毫克。经过8天的治疗，患者的发烧已经消退；使用外周血重复mNGS结果，显示了个利什曼原虫和杜诺瓦尼利什曼原虫的序列读数。出院后进一步肌肉注射硫代葡萄糖酸钠1.9g，每日1次，连续10天。在1个月后的随访中，发热、乏力和厌食已完全消失。作为一种新兴的病原体检测方法，mNGS是一种同时快速诊断各种不同生物的无偏见和无假设的方法。当生物体难以培养，并且检测灵敏度取决于组织(如利什曼病)时，它可能特别有用。参考资料：