双连血红蛋白转铁蛋白联合检测试剂盒胶

联合免疫法和化学法检测粪便隐血的临床应用评价

作者：吴鹏李艳陈进孙端阳

摘要

目的：评价转铁蛋白(Tf)/血红蛋白(Hb)联合免疫法和匹拉米洞化学法在检测消化道出血中的临床应用价值。

方法：用联合免疫法和化学法分别对例消化道出血患者和76名阴性对照粪便标本进行检测，评价2种方法的特异性、敏感性、阴性预测值和阳性预测值并用稀释已知浓度人红细胞(RBC)悬液比较2种方法检测线性范围。

结果：化学法的特异性、敏感性、阴性预测值和阳性预测值分别是54.1％、97.4％、97.1％、56.9％，而联合免疫法分别为96.7％、98.7％、99.2％、94.9％，化学法检出限高于联合免疫法。结论Tf与Hb联合免疫法可有效提高上消化道出血及大肠肿瘤的阳性检出率。

关键词：粪便隐血；血红蛋白；转铁蛋白

粪便隐血试验是诊断消化道出血及大肠肿瘤普查的重要手段，然而受到食物和机体代谢影响，由于检测原理的有限性，化学法和血红蛋白(Hb)单克隆抗体检测法均不能满足临床诊断参考的需要。为了探讨转铁蛋白(Tf)与Hb联合免疫法在临床应用中的价值，我们随机选取本院确诊消化道出血患者例的粪便标本进行了检测。

材料和方法

一、试剂

消康保便隐血联合免疫(Hb/Tf)检测试剂盒(万华普曼生物工程有限公司，北京)；匹拉米洞A、B化学试剂(台湾贝索企业中国销售公司)。

二、方法

2种检测方法均按说明书要求在5min内观察结果。化学法按反应颜色深浅判断阳性结果，颜色同标准比色卡“+”以上判为阳性。联合免疫法2条反应线分别代表Tf和Hb，任何l条出现阳性，结果判为阳性。

1.粪便标本采集和检测回顾研究经内窥镜确诊消化道出血患者例粪便标本，其中78例为上消化道出血病例，44例为下消化道出血病例，阴性对照为76名无消化道出血及相关疾病的健康体检者，同时用上述2种方法进行检测，并计算其相应的特异性、敏感性、阴性预测值和阳性预测值。

2.线性范围检测将已知Hb浓度的人抗凝全血用生理盐水稀释成浓度为、、、、20、1.0、0.5、0.1υg/mL的红细胞(RBC)悬液，再用2种方法分别进行检测。

三、统计学方法

采用Excel计算2种方法的特异性、敏感性、阴性预测值和阳性预测值，计算公式如下：特异性(SP)=[d/(b+d)]×％，敏感性(SE)=[a/(a+c)]×％，阳性预测值(PV+)=[a/(a+b)]×％，阴性预测值(PV-)=[d/(c+d)]×％，其中a为真阳性、b为假阳性、c为假阴性、d为真阴性。

结果

讨论

粪便隐血试验是检测急、慢性消化道出血和消化道恶性肿瘤的简便、常用方法之一[1]。目前在粪便隐血的实验室检查中，化学法因其操作简便价格低廉仍然被采用，比较常用的有邻甲联苯胺法、联苯胺法、匹拉米洞法等。其原理基本相同，都是基于Hb中的亚铁血红素有类似过氧化物酶作用，能催化试剂中的H作为电子受体使色原氧化呈色，呈色的深浅与Hb含量成正比。但在实际应用中由于粪便成分差别很大，外源性食物和药物对检测结果有较大影响，测试前均要求测试者控制饮食和药物[2]。而免疫法应用较早的是免疫学检测Hb法，该方法利用抗人Hb的单克隆抗体或多克隆抗体特异地检测人消化道微量的出血，因此不受食物、肉类及其他动物Hb的干扰。但是也有研究表明上消化道出血Hb法阳性率较低，是因为Hb在消化道中，受肠内细菌和消化酶的作用而变性，导致其抗原性降低，由于体液中的蛋白成分阻碍抗原抗体反应[3]，而且出血量过大时容易因前带反应造成假阴性结果，因此临床应用也有局限性。国外学者对Hb以外的血液成分如Tf、结合血红素、纤维蛋白原等作为出血依据进行了深入研究，结果发现Tf具有消化道出血的特异性和在对抗细菌分解的稳定性，在检测Hb的同时检测Tf就能减少假阴性反应的出现，提高临床诊断准确率[4]。从表1中可以看出，Hb法在检测下消化道出血时确实不及Tf法，而化学法与临床诊断符合率更低，甚至低于2种免疫法单独所得结果，这与相关报道[4]也较一致。表2中联合免疫法特异性、敏感性、阴性预测值和阳性预测值与临床诊断符合率均明显高于化学法，其特异性和阳性预测值更是达到98.7％和99.2％，是由于该法按照Tf和Hb2种方法和值来判断，尤其是Tf法对于Hb法检测上消化道出血不足之处能够起到优势互补作用。当然双连法判读结果可能存在的干扰因素在我们的实验中还考虑不够全面，以后的临床应用中还应对其进行进一步研究。

消化道生理性出血一般为0.6ml/24h，达到2ml/24h确认为病理性出血，从表3中我们还可以发现，Hb检测法检测线性下限为0.5μg/mL左右，由于血液中Hb的含量高于Tf所以此检测阈值下限也代表了双连法的最小检出限，微量病理性出血就可以检测出。而化学法检出限在20μg/mL到1μg/mL之间，消化道微量出血有可能发生漏检。联合免疫法可测出样本中的微量Hb(0.5μg/mL)，Tf法由于在血液中含量较低，在Hb浓度为μg/mL仍可呈现阳性，因此联合免疫法可以在很大程度上避免Hb检测在大量出血抗原过剩时出现前带反应造成的假阴性结果，也可以用Tf检测减少生理出血和药物刺激出血而引起的假阳性反应。以上结果说明化学法虽然能够在出血量比较多时能给予半定量的提示，但是对于总体检测线性范围不及联合免疫法。

需要注意的是粪便混有血液与检测其他体液中Hb不同，由于粪便是固体或半固体，且消化道中细菌和消化酶的作用又十分复杂，Hb或者Tf量比较低时可能因各种原因而造成假阴性，因此欲获得高符合率的结果必须遵照操作规程和试剂说明书在粪便或样本的多部位或多次取样，并结合患者的临床表现及体征综合分析结果。

参考文献

1HebennanDA，WeissDG，VeteransAffairsCooperativeStudyGroup.one-timescreeningforcolorectal-cancerwith







































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